結直腸癌（CRC）是高發惡性腫瘤，微衛星穩定型（MSS）CRC 占比超85%，對PD-1/PD-L1免疫檢查點抑制劑原發耐藥，核心原因是腫瘤微環境（TME）呈“冷腫瘤"特征——CD8?效應T細胞浸潤不足，髓系來源抑制細胞（MDSCs）、調節性T細胞（Treg）等免疫抑制細胞大量富集，形成免疫抑制屏障。
m?A甲基化是真核生物mRNA普遍的表觀轉錄修飾，YTHDF1作為關鍵m?A閱讀蛋白，可結合m?A修飾位點調控靶mRNA翻譯，在腫瘤發生發展中發揮重要作用，但YTHDF1在CRC免疫微環境重塑及MSS型CRC免疫治療耐藥中的具體機制尚未明確。本研究圍繞YTHDF1展開，旨在揭示其調控CRC免疫抑制的分子軸，并探索靶向YTHDF1聯合免疫治療的轉化潛力。
這是香港中文大學于君團隊發表在Gut（2023）的研究，核心結論：靶向m?A閱讀器YTHDF1可重塑結直腸癌（CRC）免疫微環境、增強CD8?T細胞殺傷、并與抗PD-1協同顯著提升療效，尤其可克服MSS型CRC的抗PD-1耐藥。
研究結果
（一）臨床相關性：YTHDF1是CRC免疫抑制標志物，高表達提示不良預后
1. 表達特征：TCGA、GEO公共數據集及408例CRC組織芯片（TMA）驗證，YTHDF1在CRC組織中顯著高表達，且表達水平與腫瘤分期、分級正相關。
2. 預后價值：YTHDF1高表達組患者總生存期（OS）、無病生存期（DFS）顯著縮短，是CRC獨立不良預后因素。
3. 免疫關聯：TCGA免疫浸潤分析顯示，YTHDF1高表達與CD8?T細胞、IFN-γ、GZMB等效應T細胞特征負相關，與MDSCs、Treg等免疫抑制細胞特征正相關，證實YTHDF1是CRC“冷腫瘤"的標志性分子。
（二）功能驗證：YTHDF1調控CRC生長與抗腫瘤免疫
1. 敲除抑制腫瘤，激活抗腫瘤免疫：
① 在MSS型CT26、MSI-H型MC38 CRC小鼠模型中，shYTHDF1敲除顯著抑制腫瘤生長、延長小鼠生存期。
② 機制上，YTHDF1敲除后腫瘤內CD8?T細胞、IFN-γ?CD8?T、GZMB?CD8?T細胞浸潤顯著增加，MDSCs、Treg細胞顯著減少；IFN-γ、GZMB、TNF-α等抗腫瘤細胞因子mRNA水平升高。
③ CD8?T細胞耗竭實驗證實，YTHDF1敲除的抑瘤作用依賴CD8?效應T細胞。
2. 敲入加速腫瘤發生，構建免疫抑制微環境：
① 構建腸上皮特異性Ythdf1敲入（Ythdf1KI）小鼠，聯合AOM-DSS誘導CRC，結果顯示Ythdf1KI組腫瘤數量、大小顯著增加，CRC發生進程顯著加速。
② Ythdf1KI腫瘤中CD8?T細胞浸潤減少，MDSCs、Treg細胞增加，IFN-γ、GZMB表達降低；同時p65、CXCL1蛋白水平顯著升高，提示YTHDF1通過調控NF-κB/CXCL1軸參與免疫抑制。
（三）分子機制：YTHDF1通過m?A-p65-CXCL1軸募集MDSCs，抑制CD8?T細胞
1. 核心調控軸：YTHDF1→m?A→p65翻譯→NF-κB激活→CXCL1上調：
① MeRIP-seq+Ribo-seq聯合分析發現，YTHDF1敲除后p65（RELA）mRNA的m?A修飾水平下降，翻譯效率（TE）顯著降低，mRNA水平無明顯變化。
② RIP-qPCR證實YTHDF1直接結合p65 mRNA；雙熒光素酶報告實驗+點突變驗證，p65 mRNA 3'UTR的m?A位點是YTHDF1調控其翻譯的關鍵。
③ 功能實驗顯示，YTHDF1敲除導致p65蛋白水平下降，過表達則使p65蛋白水平升高；p65下游CXCL1、CXCL2、CXCL8等趨化因子的mRNA和蛋白水平均受YTHDF1正向調控。
2. 免疫抑制閉環：CXCL1-CXCR2軸介導MDSCs募集，抑制CD8?T細胞：
① YTHDF1敲除可降低CXCL1分泌，減少MDSCs的體外遷移與體內浸潤；過表達YTHDF1則相反。
② CXCR2抑制劑（SB225002）可逆轉YTHDF1過表達誘導的MDSC募集；體內實驗中，CXCL1中和抗體或CXCR2抑制劑，能恢復YTHDF1過表達腫瘤中CD8?T細胞的浸潤與殺傷功能，抑制腫瘤生長。
③ 最終形成完整機制：YTHDF1→p65翻譯→NF-κB激活→CXCL1上調→CXCR2介導MDSCs募集→抑制CD8?T細胞。
（四）轉化價值：靶向YTHDF1聯合抗PD-1逆轉MSS耐藥，VNP遞送系統具臨床潛力
1. 聯合免疫治療增效，逆轉MSS耐藥：
① MSS型CT26模型中，抗PD-1單藥幾乎無效，而siYTHDF1+抗PD-1聯合治療顯著抑制腫瘤生長，延長小鼠生存期；MSI-H型MC38模型中，聯合治療進一步增強抗PD-1單藥療效。
② 聯合組腫瘤內CD8?T細胞、IFN-γ?CD8?T、GZMB?CD8?T細胞顯著增加，MDSCs、Treg細胞顯著減少；IFN-γ、TNF-α、IL-2等抗腫瘤細胞因子升高，IL-10、TGF-β等免疫抑制細胞因子降低。
2. 靶向遞送系統：VNP-siYTHDF1安全有效：
① 構建減毒沙門氏菌VNP包裹siYTHDF1（VNP-siYTHDF1），可靶向腫瘤微環境實現YTHDF1特異性敲低。
② CT26模型中，VNP-siYTHDF1單獨使用即可顯著抑瘤，聯合抗PD-1效果好；該遞送系統能有效降低腫瘤內YTHDF1、p65、CXCL1表達，增加CD8?T細胞浸潤、減少MDSCs。
③ 安全性評估顯示，VNP-siYTHDF1處理后小鼠體重無明顯下降，主要器官無明顯病理損傷，具備良好的臨床轉化安全性。
一句話總覽：YTHDF1高表達→通過m?A促進p65翻譯→激活NF-κB→上調CXCL1→募集MDSCs→抑制CD8?T→形成免疫抑制微環境→MSS-CRC抗PD-1耐藥；靶向YTHDF1（尤其VNP-siYTHDF1）可逆轉MDSC介導的免疫抑制，與抗PD-1協同增效，顯著抑制CRC生長。
研究意義
（一）理論意義
1. 明確YTHDF1是CRC免疫抑制的關鍵驅動因子，揭示了m?A表觀轉錄調控在腫瘤免疫微環境重塑中的新機制，完善了CRC免疫逃逸的分子網絡。
2. 闡明YTHDF1→m?A-p65→NF-κB-CXCL1→CXCR2-MDSCs的完整調控軸，為理解MSS型CRC免疫治療耐藥提供了全新的理論依據。
3. 證實YTHDF1可作為CRC預后評估與免疫治療療效預測的生物標志物，為CRC患者的分層管理提供新靶點。
（二）臨床轉化意義
1. 提出靶向YTHDF1聯合抗PD-1的新型聯合治療策略，為解決MSS型CRC免疫治療原發耐藥這一臨床難題提供了有效方案。
2. 開發的VNP-siYTHDF1靶向遞送系統，實現了YTHDF1在腫瘤微環境中的特異性敲低，兼具高效性與安全性，為YTHDF1靶向藥物的臨床轉化奠定了基礎。
3. 本研究的機制發現可拓展至其他MSS型實體瘤，為泛癌種免疫治療耐藥的逆轉提供了新思路。
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